本實(shí)驗(yàn)采用博清生物科技（南京）有限公司系列儀器，建立CYP2C19基因多態(tài)性檢測(cè)方案。通過核酸提取儀、96孔熒光定量PCR儀及微孔板讀數(shù)儀構(gòu)建自動(dòng)化檢測(cè)流程，驗(yàn)證儀器在核酸提取效率、擴(kuò)增特異性及檢測(cè)靈敏度方面的性能。結(jié)果顯示：該平臺(tái)提取的人外周血基因組DNA純度（A260/A280）達(dá)1.82±0.05，PCR擴(kuò)增Ct值變異系數(shù)<3%，最低檢測(cè)限為10pg/μL，滿足臨床藥物基因組學(xué)檢測(cè)需求。

一、材料與方法

（一）儀器設(shè)備

    核酸提取儀：用于基因組DNA提取

熒光定量PCR儀：基因擴(kuò)增與分型

微孔板讀數(shù)儀：核酸純度驗(yàn)證

超純水一體機(jī)：試劑配制與樣本稀釋

（二）實(shí)驗(yàn)方法

1、樣本處理：取200μL人外周血樣本，使用核酸提取儀（程序：裂解56℃ 10min，洗滌3次，洗脫50μL）提取基因組DNA；

2、核酸質(zhì)控：微孔板讀數(shù)儀檢測(cè)A260/A280比值及濃度，篩選合格樣本（濃度≥50ng/μL，A260/A280 1.7-1.9）；

3、PCR擴(kuò)增：反應(yīng)體系20μL（含DNA模板2μL，CYP2C19*2/*3引物探針混合液10μL），96孔PCR儀運(yùn)行程序：95℃預(yù)變性3min；95℃ 15s，60℃ 30s（40循環(huán)），F(xiàn)AM/VIC通道采集信號(hào)；

4、數(shù)據(jù)分析：通過儀器自帶軟件進(jìn)行Ct值計(jì)算與基因型判讀。

二、結(jié)果

（一）核酸提取效率

1、純度：30份樣本A260/A280均值1.82±0.05，合格率100%；

2、回收率：平均提取量（82.6±7.3）ng/200μL血，回收率達(dá)85.3%；

3、重復(fù)性：批內(nèi)CV=2.1%，批間CV=3.5%（n=5）。

（二）儀器協(xié)同性

1、提取-擴(kuò)增全流程耗時(shí)≤2.5h，較傳統(tǒng)手工操作縮短40%；

2、超純水機(jī)供水水質(zhì)穩(wěn)定，連續(xù)使用30天電阻率無波動(dòng)。

三、討論

（一）儀器性能優(yōu)勢(shì)：

1、核酸提取儀采用磁珠法自動(dòng)化操作，避免交叉污染，溫控精度±0.25℃確保裂解效率；

2、96孔PCR儀六通道設(shè)計(jì)支持多重檢測(cè)，±0.25℃控溫精度保障擴(kuò)增特異性；

3、微孔板讀數(shù)儀線性PMT技術(shù)提升低濃度樣本檢測(cè)靈敏度。

（二）應(yīng)用價(jià)值：

1、該平臺(tái)可推廣至CYP2C19基因指導(dǎo)的氯吡格雷用藥監(jiān)測(cè)，符合個(gè)體化醫(yī)療需求；

2、儀器操作界面簡(jiǎn)潔，支持20000條結(jié)果存儲(chǔ)，便于實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)管理。

（三）改進(jìn)方向：

1、建議增加樣本前處理模塊，拓展組織樣本檢測(cè)能力；

2、需進(jìn)一步驗(yàn)證儀器在高濕度環(huán)境（>80%RH）下的穩(wěn)定性。

博清生物科技（南京）有限公司儀器平臺(tái)（核酸提取儀、96孔熒光定量PCR儀、微孔板讀數(shù)儀）在CYP2C19基因檢測(cè)中表現(xiàn)出高提取效率、高擴(kuò)增特異性及良好重復(fù)性，可滿足臨床科研級(jí)藥物基因組學(xué)檢測(cè)需求，具備臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用潛力。