農(nóng)藥在保障農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)方面發(fā)揮著重要作用，但不合理使用導(dǎo)致的農(nóng)藥殘留問題，已成為威脅食品安全和人體健康的關(guān)鍵因素。有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥作為我國廣泛使用的殺蟲劑，其殘留量超標(biāo)會抑制人體乙酰膽堿酯酶活性，引發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)功能紊亂等健康風(fēng)險。因此，建立高效、快速、準(zhǔn)確的農(nóng)藥殘留檢測方法，對強化食品安全質(zhì)量控制具有重要現(xiàn)實意義。

傳統(tǒng)農(nóng)藥殘留檢測方法主要包括高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法（GC-MS）等，這些方法雖具有高靈敏度和高準(zhǔn)確性，但存在樣品前處理復(fù)雜、檢測周期長、儀器成本高、依賴專業(yè)人員操作等局限，難以滿足現(xiàn)場快速檢測和大規(guī)模篩查的需求。生物熒光檢測技術(shù)基于酶抑制原理，具有反應(yīng)快速、操作簡便、成本低廉等優(yōu)勢，已成為食品安全快速檢測領(lǐng)域的研究熱點。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計作為一款新型快速檢測儀器，采用特異性熒光探針技術(shù)，可實現(xiàn)對酶活性抑制程度的精準(zhǔn)定量分析。本研究以典型農(nóng)藥殘留為檢測目標(biāo)，系統(tǒng)驗證博清生物熒光計在實際樣品檢測中的性能指標(biāo)，旨在為其在食品安全質(zhì)量控制中的推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

一、材料與方法

（一）實驗材料

1、試劑：乙酰膽堿酯酶（AChE，活性≥500U/mL）、熒光底物（ATCh-I，純度≥98%）、毒死蜱、克百威、敵敵畏等標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥99%），甲醇、乙酸乙酯等色譜純試劑，磷酸鹽緩沖液（PBS，0.1mol/L，pH=7.4）。

2、樣品：新鮮白菜、黃瓜、蘋果等果蔬樣品，購自當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場，經(jīng)去雜、清洗、勻漿后備用。

3、儀器：博清生物熒光計，高效液相色譜儀，分析天平，高速離心機，恒溫水浴鍋。

（二）實驗方法

1、檢測體系建立

基于乙酰膽堿酯酶抑制原理構(gòu)建檢測體系：在反應(yīng)管中依次加入50μL PBS緩沖液、20μL AChE溶液，37℃孵育5min；加入20μL不同濃度農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液或樣品提取液，繼續(xù)孵育10min；加入10μL熒光底物，反應(yīng)5min后，用博清生物熒光計測定熒光強度值。以不加農(nóng)藥的體系作為空白對照，計算酶抑制率，抑制率=（空白熒光強度-樣品熒光強度）/空白熒光強度×100%。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

配制系列濃度的毒死蜱、克百威等農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照上述檢測體系進行測定，以農(nóng)藥濃度為橫坐標(biāo)，酶抑制率為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，并確定檢出限（LOD，以3倍信噪比計算）。

3、精密度實驗

選取低、中、高3個濃度的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個濃度平行測定6次，用博清生物熒光計檢測熒光強度，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD），評價儀器的精密度。

4、實際樣品檢測與回收率實驗

將果蔬樣品勻漿后，采用QuEChERS方法進行提取凈化：稱取10g勻漿樣品于50mL離心管中，加入10mL乙腈，渦旋混勻2min，加入4g無水硫酸鎂和1g氯化鈉，劇烈振蕩1min，8000r/min離心5min；取上清液5mL，加入150mg無水硫酸鎂和50mg C18吸附劑，渦旋1min，8000r/min離心5min，取上清液稀釋后作為樣品提取液。

在空白樣品提取液中加入不同濃度的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液，進行加標(biāo)回收率實驗，每個加標(biāo)水平平行測定3次，計算回收率。同時采用HPLC方法對同一批樣品進行檢測，對比兩種方法的檢測結(jié)果。

二、結(jié)果與分析

（一）標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

博清生物熒光計對兩種典型農(nóng)藥的檢測線性關(guān)系良好，線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限結(jié)果。結(jié)果顯示，毒死蜱和克百威的線性相關(guān)系數(shù)均大于0.995，檢出限分別為0.012mg/kg和0.008mg/kg，均低于GB 2763-2021《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定的限值（毒死蜱在蔬菜中限量為0.05mg/kg，克百威在水果中限量為0.02mg/kg），表明該儀器具備較高的檢測靈敏度，可滿足食品安全標(biāo)準(zhǔn)要求。

（二）精密度實驗結(jié)果

低、中、高三個濃度水平的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液精密度實驗結(jié)果顯示，毒死蜱的RSD分別為2.8%、2.1%、1.9%，克百威的RSD分別為3.2%、2.5%、2.0%，均小于5%，表明博清生物熒光計的檢測穩(wěn)定性良好，重復(fù)性佳。

（三）實際樣品檢測與回收率

選取白菜、黃瓜、蘋果3種常見果蔬樣品進行實際檢測，均未檢出目標(biāo)農(nóng)藥殘留。加標(biāo)回收率實驗結(jié)果表明，3種樣品中兩種農(nóng)藥的加標(biāo)回收率在85.3%~97.8%之間，RSD≤4.5%，符合農(nóng)藥殘留檢測的回收率要求（80%~120%）。

將博清生物熒光計與HPLC方法的檢測結(jié)果進行對比，兩種方法對加標(biāo)樣品的檢測值相對誤差均小于5%，表明博清生物熒光計的檢測準(zhǔn)確性與傳統(tǒng)國標(biāo)方法具有良好的一致性，且檢測時間從HPLC的2~3h縮短至15min以內(nèi)，顯著提升了檢測效率。

三、討論

本研究證實，博清生物熒光計在農(nóng)藥殘留檢測中具有顯著優(yōu)勢：其一，檢測速度快，單樣品從前處理到出結(jié)果僅需15min，遠(yuǎn)優(yōu)于傳統(tǒng)儀器檢測方法，可實現(xiàn)現(xiàn)場快速篩查；其二，靈敏度高，對典型農(nóng)藥的檢出限低于國家標(biāo)準(zhǔn)限值，能有效識別低濃度殘留超標(biāo)樣品；其三，操作簡便，無需專業(yè)人員和復(fù)雜實驗室條件，適合基層監(jiān)管和企業(yè)質(zhì)量控制使用。

相較于同類熒光檢測儀器，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計在穩(wěn)定性和抗干擾性方面表現(xiàn)更優(yōu)。實驗中，果蔬樣品基質(zhì)對檢測結(jié)果的影響較小，加標(biāo)回收率穩(wěn)定，表明該儀器對復(fù)雜樣品的適應(yīng)性較強。但本研究僅針對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥進行了驗證，未來可進一步拓展檢測農(nóng)藥種類，優(yōu)化檢測體系，提高對其他類別農(nóng)藥的檢測能力。

在實際應(yīng)用中，博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計可廣泛應(yīng)用于農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)基地、農(nóng)貿(mào)市場、食品加工企業(yè)等場景的農(nóng)藥殘留快速檢測，為食品安全質(zhì)量控制提供實時、高效的技術(shù)支持，有助于構(gòu)建全方位的食品安全檢測網(wǎng)絡(luò)，保障消費者飲食安全。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的熒光計基于乙酰膽堿酯酶抑制法建立的農(nóng)藥殘留檢測體系，具有檢測快速、靈敏度高、準(zhǔn)確性好、操作簡便等優(yōu)點，對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的檢出限滿足國家食品安全標(biāo)準(zhǔn)要求，實際樣品檢測回收率和精密度符合檢測規(guī)范，與傳統(tǒng)國標(biāo)方法檢測結(jié)果一致性良好。該儀器可有效解決傳統(tǒng)檢測方法效率低、操作復(fù)雜的問題，為食品安全現(xiàn)場快速檢測和質(zhì)量控制提供了可靠的技術(shù)手段，具有廣闊的推廣應(yīng)用前景。