激素與代謝指標(biāo)是評(píng)估機(jī)體內(nèi)分泌功能及代謝狀態(tài)的核心生物標(biāo)志物，其檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性直接影響內(nèi)分泌疾?。ㄈ缂谞钕俟δ墚惓?、糖尿?。?、代謝綜合征（如肥胖、高血脂）等領(lǐng)域的科研結(jié)論。目前，科研中常用的檢測(cè)技術(shù)包括高效液相色譜法（HPLC）、質(zhì)譜法（MS）及酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）：HPLC 與 MS 雖靈敏度高，但設(shè)備成本昂貴、操作流程復(fù)雜且檢測(cè)周期長(zhǎng)，難以滿足中小實(shí)驗(yàn)室批量樣本的常規(guī)檢測(cè)需求；而ELISA因操作簡(jiǎn)便、通量高、成本可控等優(yōu)勢(shì)，成為科研中激素與代謝指標(biāo)檢測(cè)的主流技術(shù)。

酶標(biāo)儀作為ELISA的核心配套設(shè)備，其光學(xué)性能（如波長(zhǎng)準(zhǔn)確性、吸光度穩(wěn)定性）與數(shù)據(jù)處理能力直接決定檢測(cè)結(jié)果的可靠性。博清生物科技（南京）有限公司作為國(guó)內(nèi)體外診斷設(shè)備領(lǐng)域的代表性企業(yè)，其研發(fā)的酶標(biāo)儀采用了雙波長(zhǎng)檢測(cè)技術(shù)及自動(dòng)校正功能，宣稱可滿足科研級(jí)檢測(cè)需求，但目前關(guān)于該設(shè)備在激素與代謝指標(biāo)檢測(cè)中的系統(tǒng)性性能驗(yàn)證研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

一、材料與方法

（一）實(shí)驗(yàn)儀器

1、主檢測(cè)儀器：博清生物酶標(biāo)儀；

2、對(duì)照儀器：品牌酶標(biāo)儀；

3、輔助設(shè)備：高速離心機(jī)、恒溫水浴箱、超低溫冰箱。

（二）實(shí)驗(yàn)試劑與樣本

1、ELISA試劑盒：胰島素、皮質(zhì)醇、T3、T4、TG、FBG；

2、標(biāo)準(zhǔn)品與質(zhì)控品：均為試劑盒配套產(chǎn)品，高、中、低3個(gè)濃度水平；

3、樣本來(lái)源：SPF級(jí)SD大鼠。大鼠禁食12h后腹腔注射10%水合氯醛（3mL/kg）麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3000r/min 離心15min分離血清，-80℃保存待測(cè)，共收集30份樣本。

（三）實(shí)驗(yàn)方法

1、樣本檢測(cè)流程

嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說(shuō)明書操作，具體步驟如下：

樣本復(fù)溶：將冷凍血清樣本置于4℃冰箱解凍，室溫平衡30min后輕輕混勻；

加樣：向96孔板中加入標(biāo)準(zhǔn)品（50μL/孔）、質(zhì)控品（50μL/孔）、樣本（50μL/孔），空白孔加等量PBS；

孵育與洗板：每孔加酶標(biāo)二抗（50μL/孔），37℃恒溫水浴箱孵育60min；孵育結(jié)束后，用洗滌液洗板5次，每次浸泡30s，拍干殘留液體；

顯色與終止：每孔加底物溶液（100μL/孔），37℃避光孵育15min；加終止液（50μL/孔），輕輕混勻；

2、性能驗(yàn)證指標(biāo)與數(shù)據(jù)分析

精密度：選取高、中、低3個(gè)濃度的質(zhì)控品，每個(gè)濃度重復(fù)檢測(cè)10次（批內(nèi)），連續(xù)檢測(cè)5天（批間），計(jì)算批內(nèi)CV（公式：CV=（標(biāo)準(zhǔn)差/均值）×100%）與批間CV，CV<5%為合格；

準(zhǔn)確度：采用加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，向已知濃度的大鼠血清樣本中加入高、中、低3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)濃度平行檢測(cè)3次，計(jì)算回收率（公式：回收率=（加標(biāo)后檢測(cè)濃度-加標(biāo)前檢測(cè)濃度）/加標(biāo)量×100%），回收率85%-115%為合格；

結(jié)果一致性：對(duì)30份大鼠血清樣本進(jìn)行平行檢測(cè)，以檢測(cè)結(jié)果為橫坐標(biāo)，博清生物酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果為縱坐標(biāo)，繪制散點(diǎn)圖并進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，R2>0.95為一致性良好；

線性范圍：將各指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)品按濃度梯度稀釋（0、1/8、1/4、1/2、1、2倍標(biāo)準(zhǔn)品濃度），檢測(cè)OD值，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)、OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算線性相關(guān)系數(shù)r，r>0.99為線性良好。

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 26.0軟件分析，計(jì)量資料以“均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）”表示，P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）博清酶標(biāo)儀的精密度驗(yàn)證

博清生物酶標(biāo)儀檢測(cè)6項(xiàng)指標(biāo)的批內(nèi)CV為1.23%-3.85%，批間CV為1.89%-4.52%，均低于5%的合格標(biāo)準(zhǔn)，其中胰島素、T3的CV值最低（批內(nèi)<2%，批間<3%），表明該儀器在激素與代謝指標(biāo)檢測(cè)中具有良好的重復(fù)性與穩(wěn)定性。

（二）博清酶標(biāo)儀的準(zhǔn)確度驗(yàn)證

6項(xiàng)指標(biāo)的加標(biāo)回收率為88.6%-109.2%，均處于85%-115% 的合格范圍內(nèi)，其中胰島素、T3、T4的回收率更接近100%（92.5%-105.3%），表明博清生物酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性良好，可真實(shí)反映樣本中指標(biāo)的實(shí)際濃度。

（三）博清酶標(biāo)儀與參比儀器的結(jié)果一致性

檢測(cè)30份大鼠血清樣本的結(jié)果呈顯著正相關(guān)，6項(xiàng)指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)R2均>0.98（P<0.001），其中胰島素（R2=0.992）、T3（R2=0.991）的一致性最佳，TG（R2=0.983）、FBG（R2=0.985）的一致性略低但仍符合科研要求，表明博清酶標(biāo)儀的檢測(cè)結(jié)果與國(guó)際主流品牌儀器具有高度一致性，可用于科研數(shù)據(jù)的橫向?qū)Ρ取?/span>

（四）博清酶標(biāo)儀的線性范圍驗(yàn)證

各指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)r均>0.99，其中胰島素（r=0.998）、T4（r=0.997）的線性關(guān)系最穩(wěn)定，TG（r=0.992）的線性略低但仍滿足ELISA檢測(cè)要求，表明博清生物酶標(biāo)儀在試劑盒規(guī)定的濃度范圍內(nèi)，可準(zhǔn)確擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)現(xiàn)樣本濃度的精準(zhǔn)計(jì)算。

三、討論

激素與代謝指標(biāo)的精準(zhǔn)檢測(cè)是內(nèi)分泌及代謝科研的基礎(chǔ)，而酶標(biāo)儀的性能直接決定檢測(cè)結(jié)果的可靠性。本研究從精密度、準(zhǔn)確度、結(jié)果一致性及線性范圍4個(gè)核心維度，系統(tǒng)驗(yàn)證了博清生物酶標(biāo)儀的科研適用性，結(jié)果表明該儀器可滿足激素與代謝指標(biāo)的常規(guī)檢測(cè)需求，具體優(yōu)勢(shì)如下：

（一）性能穩(wěn)定，滿足科研級(jí)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

本研究中，博清生物酶標(biāo)儀的批內(nèi)CV<4%、批間CV<5%，顯著低于ELISA檢測(cè)的行業(yè)CV上限（通常為10%），表明其在重復(fù)檢測(cè)中具有良好的穩(wěn)定性；加標(biāo)回收率88.6%-109.2%，符合“85%-115%”的準(zhǔn)確度要求，可避免因儀器誤差導(dǎo)致的檢測(cè)結(jié)果偏離；與國(guó)際主流品牌酶標(biāo)儀的R2>0.98，說(shuō)明其結(jié)果可與現(xiàn)有科研數(shù)據(jù)兼容，降低了設(shè)備更換導(dǎo)致的數(shù)據(jù)偏差風(fēng)險(xiǎn)。

（二）操作便捷，適配科研批量檢測(cè)場(chǎng)景

博清生物酶標(biāo)儀支持96孔板同時(shí)檢測(cè)，單批次檢測(cè)時(shí)間<30min（含OD值讀取與數(shù)據(jù)計(jì)算），且具備自動(dòng)波長(zhǎng)校正及標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合功能，可減少人工操作誤差；此外，該儀器與國(guó)內(nèi)主流ELISA試劑盒兼容性良好，無(wú)需額外調(diào)整檢測(cè)參數(shù)，降低了科研人員的操作門檻，尤其適合中小實(shí)驗(yàn)室的批量樣本檢測(cè)。

（三）成本可控，性價(jià)比優(yōu)勢(shì)顯著

相較于國(guó)際主流品牌酶標(biāo)儀成本較高，博清生物酶標(biāo)儀的采購(gòu)成本更低，且耗材（如檢測(cè)板、洗滌液）可適配國(guó)產(chǎn)試劑，進(jìn)一步降低科研成本。對(duì)于經(jīng)費(fèi)有限的中小實(shí)驗(yàn)室或需要多臺(tái)設(shè)備并行檢測(cè)的團(tuán)隊(duì)，該儀器可在保證檢測(cè)質(zhì)量的前提下，提升科研資源的利用效率。

（四）研究局限性與未來(lái)方向

本研究存在以下局限性：①樣本類型僅為大鼠血清，未涵蓋人血清、血漿或組織勻漿等其他科研常用樣本，未來(lái)需進(jìn)一步驗(yàn)證儀器在不同樣本類型中的適用性；②檢測(cè)指標(biāo)僅包含6項(xiàng)核心指標(biāo)，未涉及性激素（如雌激素、睪酮）、 adiponectin等新興代謝標(biāo)志物，需擴(kuò)展指標(biāo)范圍以覆蓋更多科研場(chǎng)景；③未評(píng)估儀器在長(zhǎng)期使用（如1年以上）后的性能衰減情況，需開展長(zhǎng)期穩(wěn)定性監(jiān)測(cè)。

博清生物科技（南京）有限公司研發(fā)的酶標(biāo)儀在激素與代謝指標(biāo)檢測(cè)中具有良好的精密度、準(zhǔn)確度及結(jié)果一致性，線性范圍穩(wěn)定，且操作便捷、成本可控，可作為內(nèi)分泌及代謝相關(guān)科研的常規(guī)檢測(cè)設(shè)備。未來(lái)可通過(guò)擴(kuò)展樣本類型、增加檢測(cè)指標(biāo)及長(zhǎng)期穩(wěn)定性驗(yàn)證，進(jìn)一步提升該儀器的科研應(yīng)用場(chǎng)景覆蓋度。